SARS-CoV-2 Nukleinsäure-Testkit

Verwendungszweck:

Das SARS-CoV-2-Nukleinsäure-Testkit dient zum qualitativen Nachweis der Nukleinsäure von COVID-19 in Nasen-Rachen-Abstrichen, Oropharynx-Abstrichen und Sputum. Die Testergebnisse liefern eine molekulardiagnostische Grundlage für Infektionen oder Verdachtspatienten und sollten nicht als alleiniges Kriterium für die klinische Diagnose verwendet werden.

Materialien:

Testprozedur:

A. Probenvorbereitung

Extrahierte RNA ist das Ausgangsmaterial für das SARS-CoV-2-Nukleinsäure-Testkit.

Wichtig: Jedes Nukleinsäureextraktionsverfahren muss gleichzeitig mit einer Positivkontrolle (40 μl, mit steriler Kochsalzlösung/PBS auf das gewünschte Volumen verdünnen) und einer Negativkontrolle (40 μl, mit steriler Kochsalzlösung/PBS auf das gewünschte Volumen verdünnen) durchgeführt werden.

Es wird empfohlen, die folgenden kommerziellen Nukleinsäure-Extraktionskits zu verwenden: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Virus-RNA-Mini-Kit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA-Kit (TIANGEN);

B. Aufbau des Reaktionsgemisches

1. Alle Reagenzien und Proben sollten vor Gebrauch vollständig aufgetaut, vollständig gemischt und kurz bei Raumtemperatur (ca. 18 bis 25 Grad) zentrifugiert werden.

2. Bereiten Sie das erforderliche Volumen der Reaktionsmischung in einem Polypropylen-Mikrozentrifugenröhrchen geeigneter Größe vor.

3. Pipettieren Sie 25 µl des Reaktionsgemischs in jede erforderliche Vertiefung einer geeigneten optischen 96-Well-Reaktionsplatte oder eines geeigneten optischen Reaktionsröhrchens.

C. Template-Hinzufügung

1. Fügen Sie 5 μl extrahierte RNA aus Proben/Positivkontrolle/Negativkontrolle hinzu. Das Gesamtvolumen beträgt 30 μl.

2. Mischen Sie die Proben und Kontrollen gründlich mit dem Reaktionsmix, indem Sie auf- und abpipettieren/vortexen.

3. Verschließen Sie die 96-Well-Reaktionsplatte mit geeigneten Deckeln oder optischer Klebefolie und die Reaktionsgefäße mit geeigneten Deckeln.

4. Zentrifugieren Sie die 96-Well-Reaktionsplatte in einer Zentrifuge mit Mikrotiterplattenrotor für 30 Sekunden bei etwa 2500 U/min.

D. Programmierung des Echtzeit-PCR-Instruments

Grundlegende Informationen zur Einrichtung und Programmierung der verschiedenen Real-Time-PCR-Geräte finden Sie im Benutzerhandbuch des jeweiligen Geräts. Der Assay wurde für das ABI7500 Real-Time-PCR-System optimiert. Der PCR-Lauf wird unter zyklischen Bedingungen durchgeführt, wie in der nachstehenden Tabelle beschrieben.

Definieren Sie die Fluoreszenzdetektoren

*Bitte stellen Sie die interne Fluoreszenzreferenz des Instruments auf „None“ ein, zum Beispiel: Bei Instrumenten der ABI-Serie stellen Sie „Passive Reference“ auf „None“.

E. Datenanalyse

Bitte stellen Sie die Analyseparameter ein und analysieren Sie die Daten gemäß den Bedienungsanleitungen der jeweiligen Geräte.

Nehmen wir als Beispiel ABI 7500:

Die Grundlinie sollte auf einen Bereich eingestellt werden, der die in den frühen Amplifikationszyklen gefundene Hintergrundfluoreszenz eliminiert, aber nicht den Bereich überlappt, in dem Amplifikationssignale über den Hintergrund steigen (Startwert: 3~10; Endwert: {{2} }). Der Zyklusschwellenwert (Ct) sollte in der Basis der exponentiellen Phase liegen. Klicken Sie auf „Analyse“, um das Analyseergebnis automatisch zu erhalten, und lesen Sie das Erkennungsergebnis im Fenster „Bericht“.

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